小RNA是指长度在18-30nt的内源性非蛋白质RNA,广泛存在于高等和低等生物体内,对mRNA的转录及转录后水平等生命过程起调节作用。
小RNA可归纳成三类:miRNA(微RNA),siRNA(小干扰RNA)和与piRNA(piwi相互作用的RNA)。它们以通过沉默和降解其靶点基因分子的方式控制基因表达,在生物体正常生长发育和疾病发生过程中起着不可忽视的调控作用。新一代测序技术提供一套全新独特的,适用于各个物种的小RNA深度鉴定与定量分析的研究平台。通过深度的测序,可以发掘、鉴定并定量出任何物种全基因组水平的小RNA图谱,推进了对小RNA功能的研究。
应用领域
基因转录后调控研究
基因沉默研究
small RNA靶标分析和调控网络
信息分析
1. 标准信息分析
a) 数据产出统计,对原始测序数据去接头,去低质量,去污染
b) 18~30 nt small RNA 的长度分布
c) 样品间的公共序列和特异序列的分析
d) Small RNA 在选定的参考基因组上的分布(只能选定一个参考基因组)
e) Small RNA 与rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA的比对信息
f) Small RNA 与重复序列的比对信息(需提供选定参考基因组对应的重复序列注释信息)
g) Small RNA 与 exon/intron 的比对信息(需提供选定参考基因组对应的基因注释信息)
h) Small RNA 与 miRBase 中指定范围的已知的 miRNA 的比对
i) 按照优先级将 small RNA 进行分类注释
j) 利用Mireap 对没有注释的small RNA 进行预测,预测新的 miRNA,绘制新的miRNA 的 二级结构图
k) 已知miRNA 的表达量统计
l) 已知miRNA 的家族分析(需要提供参考物种拉丁文名称)
2. 高级信息分析
a) 样品间miRNA 差异分析(2个或2个以上样品)和聚类分析(3个或3个以上样品)
b) MiRNA 靶基因预测(需要提供基因编码序列)
c) MiRNA靶基因GO注释和KEGG通路分析
d) MiRNA 的碱基编辑分析(已知miRNA)
根据客户需求,协商确定分析内容
客户需提供的样品
样品类型:完整且无污染的总RNA
样品需求量:≥10 μg。样品浓度:≥200 ng/μl
样品纯度:植物RIN≥7.5,28s/18s≥1.3;动物RIN≥8.0,28 S/18 S≥1.5
血清/血浆RNA或免疫共沉淀RNA等特殊样品,请提供浓度≥1 ng/μl、总量≥50 ng的样品(至少需要5 ml血清)。要求蛋白等杂质污染较少,不影响正常PAGE分离
Small RNA(<200nt)样品浓度≥20ng/μl、总量≥1μg。
项目周期
标准流程的运转周期约为45个工作日